動(dòng)物癥狀觀察：

表現(xiàn)為體重減輕、弓背豎毛，在回輸后的一個(gè)月后死亡。

實(shí)驗(yàn)中涉及動(dòng)物的操作程序已經(jīng)得到中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用與管理委員會(huì)的批準(zhǔn)(ILAS-GC-2012-001)。

1. 發(fā)現(xiàn)DOCA+HS處理兩周時(shí)，年老的C57小鼠即開(kāi)始形成動(dòng)脈瘤。

圖1.乙酸脫氧皮質(zhì)酮（DOCA）加鹽在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)衰老小鼠主動(dòng)脈瘤的誘導(dǎo)作用。A.老齡小鼠的代表性超聲圖像和主動(dòng)脈照片在不同的時(shí)間點(diǎn)使用DOCA加鹽或單獨(dú)加鹽。B.量化腹主動(dòng)脈的外徑。C. 老年小鼠施用DOCA加鹽或單獨(dú)加鹽后的存活曲線。D. 使用DOCA加鹽或僅在不同時(shí)間加鹽的成年小鼠的主動(dòng)脈瘤發(fā)生率。

2. 乙酸脫氧皮質(zhì)酮（DOCA）加鹽對(duì)衰老小鼠在不同時(shí)間點(diǎn)的血管病理學(xué)的影響。

圖2. A.來(lái)自DOCA加鹽或單獨(dú)加鹽的不同時(shí)間點(diǎn)的老年小鼠蘇木精和曙紅（HE）的主動(dòng)脈染色的代表性照片。B. Masson染色的代表性照片顯示了不同組的膠原蛋白沉積。C. 彈性蛋白染色的代表性照片展示了來(lái)自不同群體的主動(dòng)脈的彈性蛋白完整性。D. α-SMA（α-平滑肌肌動(dòng)蛋白，血管平滑肌細(xì)胞）的免疫組織化學(xué)染色顯示在DOCA加鹽給藥后平滑肌細(xì)胞變性。

3. 醋酸脫氧皮質(zhì)酮（DOCA）加鹽對(duì)衰老小鼠在不同時(shí)間點(diǎn)的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)以及炎癥細(xì)胞因子、粘附因子和纖維化因子表達(dá)的影響。

圖3. A-C.免疫熒光檢測(cè)在不同時(shí)間點(diǎn)給予DOCA加鹽或鹽單獨(dú)處理的老齡小鼠主動(dòng)脈組織中CD3陽(yáng)性T細(xì)胞，CD68陽(yáng)性巨噬細(xì)胞和ly6B.2陽(yáng)性嗜中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)。D. 主動(dòng)脈中促炎因子（TNF-α，IL-6，IL-1β，CCL-2）的mRNA表達(dá)水平逐漸升高，而抗炎因子（IL-10，IL-13）的mRNA表達(dá)水平逐漸降低老年小鼠的組織施用DOCA加鹽。

4. 在DOCA加鹽處理過(guò)的小鼠的主動(dòng)脈中差異表達(dá)的基因的RNA序列分析。

圖4. 在DOCA加鹽處理過(guò)的小鼠的主動(dòng)脈中差異表達(dá)的基因的RNA序列分析，這些小鼠已形成動(dòng)脈瘤（n = 3），未發(fā)育到動(dòng)脈瘤（n = 5）。A.給予DOCA加鹽或僅加鹽的成年小鼠主動(dòng)脈之間轉(zhuǎn)錄差異的熱圖。 | logFC | ≥2和Padj <0.005被設(shè)置為嚴(yán)格截止。B. 使用Reactome Pathway數(shù)據(jù)庫(kù)，以p <0.05為閾值，對(duì)上調(diào)和下調(diào)的差異表達(dá)基因進(jìn)行GO富集分析。C. 熱圖顯示了一些關(guān)鍵的差異表達(dá)基因，這些基因富含止血，免疫系統(tǒng)和細(xì)胞外基質(zhì)組織途徑。

1.C57小鼠，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（PSGL-1-KO小鼠） ，名稱：C57，近交系（InbredRat）

品系來(lái)源 ：（1）遺傳背景及亞系:1921年Ltle用 Abbg Lathrop的小鼠株雌鼠57號(hào)與雄鼠52號(hào)交配，而得C57BL6。亞系:C57BL6、C57B/6、C57BL/6N等。 (2)毛色基因標(biāo)記：aa、BB、CC（黑色）(3)主要遺傳學(xué)特征：a.免疫學(xué)特征：一般飼養(yǎng)條件下免疫球蛋白的量隨年齡而增加，而到生后20個(gè)月時(shí)則1gG增長(zhǎng)緩慢，無(wú)菌飼養(yǎng)的絕對(duì)量較低。gM水平較高，出生12月以后，有的個(gè)體超過(guò)80ug/mL。無(wú)菌飼養(yǎng)的動(dòng)物lgM量比一般飼養(yǎng)的高。細(xì)胞免疫低下者少見(jiàn)，這可能與自發(fā)腫瘤少有關(guān)。b.形態(tài)學(xué)特征：在新生鼠中，雌鼠為16.8%，雄鼠3%為小眼或無(wú)眼癥。0.6%后肢可見(jiàn)多趾癥，另外水頭癥占2%4%，耳頭癥占0.4%，交合不全占3%。c.生理學(xué)特性：有強(qiáng)嗜酒精性。對(duì)放射性照射為中等強(qiáng)度感應(yīng)度，LD50為630+4R，將雄鼠皮膚移植到同系的雌鼠身上，約20日被排斥掉，這是因?yàn)樵诮M織相容性抗原中的雄抗原在C57BL中非常顯著。d.癌發(fā)生率：乳癌發(fā)生率低，為01%，白血病為7%-16%化學(xué)致癌成功率低，放射性照射較容易誘發(fā)肝癌。

2.主動(dòng)脈瘤對(duì)照小鼠：C57小鼠，名稱：C57，同類系（ConsomicRat）

3.誘導(dǎo)方法：C57小鼠根據(jù)體重，三溴乙醇麻醉0.18ml/10g體重，（360mg/kg體重）（三溴乙醇儲(chǔ)存液：25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇，使用液：0.50ml儲(chǔ)存液+39.5ml生理鹽水），俯臥位固定于加熱墊上保持體溫，背部頸部脫毛膏脫毛，酒精消毒處理，無(wú)菌手術(shù)剪剪開(kāi)后背頸部皮膚，用鑷子將皮下探查出一個(gè)可以足夠裝下藥品的空間，將DOCA緩釋泵塞入皮下，鑷子將該處皮膚對(duì)齊復(fù)合，無(wú)菌縫合線縫合皮膚，放置在加熱板上保暖，待蘇醒后放回鼠盒，手術(shù)后用止痛果凍緩解疼痛。

主動(dòng)脈瘤(aortic aneurysm)指主動(dòng)脈壁局部或彌漫性的異常擴(kuò)張超過(guò)正常值50%以上，壓迫周圍器官而引起癥狀，常發(fā)生在升主動(dòng)脈主動(dòng)脈弓、胸部降主動(dòng)脈、胸腹主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈，其發(fā)病率在老年人群中可以高達(dá)5-10%，并呈上升趨勢(shì)。主動(dòng)脈瘤可由多種因素引起，如家族遺傳、高血壓、動(dòng)脈硬化等，其主要病理改變?yōu)檠鼙趶椓w維斷裂、平滑肌細(xì)胞病變和血管外膜膠原沉積。

由于主動(dòng)脈瘤是一種慢性血管炎癥性疾病，近年來(lái)可以誘發(fā)血管炎癥的多種因素與該疾病的發(fā)生機(jī)制研究一直被人們關(guān)注，包括鹽皮質(zhì)激素、血管緊張素II等，其中醋酸脫氧皮質(zhì)酮（DOCA）是一種類固醇激素，可以與體內(nèi)的鹽皮質(zhì)激素受體結(jié)合，影響機(jī)體內(nèi)鈉水代謝，進(jìn)而誘發(fā)慢性炎癥反應(yīng)。有研究表明高鹽加DOCA緩釋刺激可以通過(guò)激發(fā)血管的炎癥反應(yīng)而誘發(fā)小鼠動(dòng)脈瘤的發(fā)生，并且該影響與年齡因素密切相關(guān)。本研究通過(guò)高鹽加DOCA的方法建立小鼠血管瘤模型，并觀察影響該疾病的相關(guān)通路因子，通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)增加或降低關(guān)鍵通路因子，進(jìn)一步探索該疾病的病理生理發(fā)生機(jī)制，為該疾病的預(yù)防治療提供新方法和思路。